运输方式
高铁运输
1、防震泡沫箱运输。
2、将保温箱固定在车厢地板防滑槽上，避免急刹车或加速时移位。
3、高铁到站后接驳快递。
文章引用
略
适用范围
胰岛细胞的科研用途主要包括以下方面：
糖尿病机制与治疗研究：用于解析1型/2型糖尿病病理机制，如胰岛β细胞功能缺陷或胰岛素抵抗，并开发细胞替代疗法（如干细胞分化的胰岛细胞移植）。
再生医学与细胞疗法：通过化学重编程将体细胞转化为多能干细胞，再定向分化为功能性胰岛细胞，实现糖尿病功能性治愈，如瑞普晨创的RGB-5088注射液通过自体细胞移植摆脱胰岛素依赖。
药物筛选与毒性评估：作为体外模型测试药物对胰岛素分泌、糖代谢的影响，或评估药物肾毒性（如糖尿病肾病研究）。
代谢调控与信号通路研究：探究胰岛α/β细胞在糖、脂肪、蛋白质代谢中的作用，以及TGF-β、Wnt、神经酰胺代谢等通路对细胞功能成熟的调控。
疾病模型构建：利用原代胰岛细胞或多能干细胞衍生的胰岛细胞构建体外模型，模拟糖尿病进展及并发症机制。
这些研究不仅推动糖尿病治疗（如临床移植和功能性治愈），还拓展至代谢疾病、药物开发等领域。
由于我司产品说明书半年更新一次，以下步骤仅作参考，以公司随货说明书为准
II 试剂与材料
Ø 胰岛细胞（Cat# LV-Lslet001/2/3/4）
Ø 胰岛细胞维持培养基（RPMI 1640 (10% FBS，1% Antibiotic-Antimycotic））
Ø 体式显微镜
Ø 生物安全柜
Ø 无菌15mL离心管
Ø 恒温水浴锅
Ø 37℃/ 5% CO2培养箱
Ø 非TC-treated 100mm细胞培养皿
Ø 胶原包被培养皿
Ø 移液枪及宽口移液枪头
Ø AO/PI染料
Ø 0.25% trypsin-EDTA
Ø GSIS试剂盒
III细胞转运
1. 通过胶原酶灌注法分离得到胰腺细胞悬液。
2. 通过体式显微镜进行人工挑选，获得高纯度的胰岛团细胞。
3. 双尿腙染色法确定胰岛细胞纯度。利用AO/PI活死细胞染色确定胰岛活力和形态是否达到发货要求。
4. 胰岛细胞装在15mL离心管中（低温运输），通过高铁或空运至研究者的实验室。
5. 本品为无菌包装，2-8℃低温保存和运输；从包装到重新培养的冷保存时间不超过24 h。
IV 收到细胞后的处理
1. 收到细胞后用75%酒精对外包装进行消毒，转移至生物安全柜中。
2. 离心（100g，4℃，5分钟），去上清，加入适量胰岛细胞维持培养基重悬细胞。
3. 用移液枪将胰岛小心吸出，加至新的35 mm无菌培养皿，或者6孔板中（不超过300个胰岛/孔），每孔加3 mL胰岛培养液；或加至12孔板中（不超过 300个胰岛/孔），每孔加2mL培养液；在37℃5%CO2条件下进行无菌培养；培养时间建议不超过7日，每3天换液1次。
4. 加入新鲜的维持培养基，待用。
V 细胞培养
1. 将胰岛维持培养基于37℃恒温水浴锅中预热20min。
2. 生物安全柜中，在非TC-treated 100mm细胞培养皿中加入10mL胰岛细胞维持培养基，备用。
3. 取适量新鲜的胰岛细胞，用AO/PI染色观察胰岛细胞的死活情况。
4. 悬浮培养：按照客户铺板要求，将细胞铺板到非TC-treated 100mm细胞培养皿，胰岛细胞培养的密度建议为10~20个/mL胰岛细胞维持培养基，3~4天半量换液，7天一次全量换液。请尽快完成实验。
5. 贴壁培养：按照客户铺板要求，将细胞铺板到胶原包被100mm细胞培养皿，每2天换液1次。可用胰酶进行传代，可传2-3代。
VI GSIS葡萄糖刺激下的胰岛素分泌实验
1. 溶液准备
（1）Krebs缓冲储备液
成分 | 用量(g/L) |
HEPES粉末 | 5.955 |
NaCl | 6.721 |
NaHCO3 | 2.012 |
KCl | 0.373 |
MgCl2.6H2O | 0.203 |
CaCl2 | 0.276 |
BSA | 1.000 |
去离子水 | 定容至1L |
测定缓冲液的PH值，如果PH值不在7.4±0.05，可用1N NaOH或1N HCl调节溶液的PH；配制完成后，在生物安全柜内用0.22μm过滤器过滤和灭菌。
（2）280mM葡萄糖储备液
成分 | 用量 |
葡萄糖 | 2.52g |
Krebs缓冲储备液 | 50mL |
配制的容量可根据需要进行调整，配制完成后，在生物安全柜内用0.22μm过滤器过滤和灭菌；然后分装到灭菌的1.5mL EP管中，每管1mL，放-20℃储存（避免反复冻融）。
（3）28mM葡萄糖储备液（高糖）
成分 | 用量 |
280mM葡萄糖 | 1mL |
Krebs缓冲储备液 | 9mL |
（4）2.8mM葡萄糖储备液（低糖）
成分 | 用量 |
28mM葡萄糖 | 1mL |
Krebs缓冲储备液 | 9mL |
2. 操作步骤
1. 用75%酒精浸泡镊子后用无菌纱布擦拭干净，放在另一块无菌纱布上。
2. 取一个12孔板，设置第一列3个孔，分别为A1，B1，C1，第二列3个孔，分别为A2，B2，C2，第三列3个孔，分别为A3，B3，C3，第四列3个孔，分别为A4，B4，C4。
3. 在第一列孔板A1，B1，C1中放入直径12mm，孔径0.4μm的筛网，A1，A2，A3，B1，B2，B3，C1，C2，C3都加入1mL低糖葡萄糖储备液；A4，B4，C4加入1mL高糖储备液（加储备液时，沿孔壁加入并往筛网中轻轻加少许储备液，起到平衡的作用，注意枪头不要戳到筛网底部，容易戳坏）。
4. 将需要刺激的胰岛吸到筛网中（尽量不要吸取培养基），适当摇晃一下清洗，用镊子提起筛网，放在无菌纱布上吸干液体，放到A2，B2，C2中，然后放入37℃/5% CO2培养箱中浸泡1h（目的是让胰岛适应该环境）。
5. 1h后再用镊子提起筛网，放在无菌纱布上吸干液体，再放入A3，B3，C3中，然后放入37℃/5% CO2培养箱中刺激1h；
6. 在刺激的这1h中，准备好足够的无菌1.5mL EP管，做好标记；
7. 1h后，从培养箱中取出12孔板，沿孔壁和筛网的缝隙中吸出刺激液，并放入标记好的EP管中，然后用镊子提起筛网，放在无菌纱布上吸干液体，再放入A4，B4，C4中，然后放入37℃/5% CO2培养箱中刺激1h。
8. 1h后，从培养箱中取出12孔板，沿孔壁和筛网的缝隙中吸出刺激液，并放入标记好的EP管中，吸出刺激液后，往A4，B4，C4中加入1mL RPMI1640（10%FBS+1%Anti-Anti），放入37℃/5% CO2培养箱中培养，装了样并标记好的EP管放到-20℃指定地存放（一周内检测的可放在4℃冰箱存放）。
9. Elisa试剂盒检测上清中的胰岛素含量。
VII 胰岛细胞移植
根据不同受体和移植位点的需求或者具体实验要求，挑取指胰岛当量（IEQ）的胰岛细胞，移植到指定受体的具体移植位点中，每天监测受体的血糖变化和身体状况并作记录。
正常情况下1只C57糖尿病小鼠需要400个胰岛可明显看到降血糖效果。
