I 简介
HepAD38 是将HBV复制基因（D 基因型）稳定转入HepG2肝癌细胞系中，受四环素Tet或者四环素类似物Doxycycline调控开关乙肝病毒复制。该细胞系的乙肝病毒复制效率为HepG2.2.15的十倍，主要用于乙肝病毒复制研究、抗病毒药物筛选以及作为乙肝病毒感染性病毒粒子的产毒细胞株。请在生物安全二级实验室BSL-2中进行相关实验，做好个人防护。
HepAD38建系文章：S K Ladner 1, M J Otto, C S Barker, K Zaifert, G H Wang, J T Guo, C Seeger, R W King.Inducible expression of human hepatitis B virus (HBV) in stably transfected hepatoblastoma cells: a novel system for screening potential inhibitors of HBV replication.Antimicrob Agents Chemother. 1997 Aug;41(8):1715-20. doi: 10.1128/AAC.41.8.1715. PMID: 9257747 PMCID: PMC163991 DOI: 10.1128/AAC.41.8.1715.
II 试剂与材料
HepAD38 肝癌细胞系
常规培养基（DMEM/F12+10%FBS+1%PS+0.3µg/ml Tet）
筛选培养基（常规培养基+400µg/ml G418）
PBS
0.5%胰酶
移液枪头与移液枪
胶原包被板培养瓶
恒温水浴锅（37℃预热）
生物安全柜
离心机
37℃/5%CO2培养箱
75%酒精
III 冻存细胞的复苏与铺板
1. 紫外消毒生物安全柜15min；取10ml常规培养基于15ml离心管中，放入37℃恒温水浴锅中充分预热。
2. 将冻存的肝细胞从冷藏位置经液氮迅速转移至37℃恒温水浴锅中，将冻存管尽可能多的浸入37℃水中， 顺时针水平摇动，但必须确保冻存管管盖保持在水面以上。
3. 解冻冻存管约90-120s，至冻存管中只有少量碎冰漂浮即可。
4. 用75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。
5. 300g，4℃离心5min，去掉上清并用常规培养基重悬。
6. 沉淀的细胞用常规培养基重悬并定容至4ml，用台盼蓝排除法测定细胞的活力和细胞总量。
7. 将细胞以1.5×104cells/cm2的密度接种至胶原包被培养瓶中，摇匀，在37℃/5% CO2培养箱中培养，24h后换液，之后隔天换液。
IV 新鲜细胞的处理、培养、冻存与筛选
1. 紫外消毒生物安全柜15min；并对培养瓶进行酒精消毒。
2. 用移液器去除培养基，留5ml培养基，多余培养基过滤待用（后续操作，用过滤后的培养基进行培养， 直至冻存一批后，可逐渐更换成研究者自己的培养基，以免发生培养基不适应）。
3. 培养24-48小时（具体看细胞密度），细胞已经长满80%融合度，吸除旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，约 2~3min；加入常规培养基终止消化。
4. 收集细胞悬液，于300g，常温离心5min，去上清并用常规培养基重悬。
5. 按体积比1：3或者1：4传代，将细胞悬液接种到新的胶原包被培养瓶内，置 37℃/5% CO2培养箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
6. 冻存细胞，利用常规冻存液:（10%DMSO+45%FBS+45%DMEM）进行细胞冻存， 程序降温盒降温。
7. 为了达到更好的乙肝病毒复制/产毒效率，需对细胞系进行筛选，利用筛选培养基筛选1-2周，可对筛选后的细胞进行保存，用于后续试验。
8. 为了达到更好的乙肝病毒复制/产毒效率，需对细胞系进行筛选，利用筛选培养基筛选1-2周，可对筛选后的细胞进行保存，用于后续试验。
9. 建系背景请参文献：
PMID: 9257747
10. 乙肝病毒感染性病毒粒子的制备参考文献：
PMID: 28971350，DOI: 10.1007/s12250-017-3983-x
按照常规癌细胞系冻存即可
VI 关于售后
如您发现产品有任何质量问题，请您收集原始数据，并第一时间联系公司销售或者技术支持，公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同，操作人员习惯不同，熟练程度不一样，实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限，公司不做售后，请老师理解与支持。
售后有效期与提供的原始数据：
复苏问题：立刻报告异常；提供台盼蓝染色或者AO/PI染色。
污染问题：复苏96小时以内；提供相差显微镜照片。
纯度问题：一个月内；提供免疫荧光或者流式结果。
VII 联系电话
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