I 简介
hNTCP稳转肝癌Huh7D细胞系为中科院某实验室开发的，授权我司进行细胞共享。Huh7D是从若干株Huh7细胞中经过2.5%DMSO、4%PEG8000耐受实验筛选得到的一株优异的细胞系，主要优点是在2.5%DMSO诱导下，细胞呈致密单层、细胞发生明显极化和细胞分化、可长期维持、耐受4%PEG8000毒性等。通过慢病毒介导的乙肝病毒受体hNTCP过表达，细胞保存良好的细胞性状，高表达hNTCP，具有优异的乙肝病毒易感性。本细胞仅用于科学研究，除被授权外，不得转移给第三方使用，后果自负。
Huh7DhNTCP部分文章引用：
1、Zhou M, Zhao K, Yao Y, Yuan Y, Pei R, Wang Y, Chen J, Hu X, Zhou Y, Chen X, Wu C. Productive HBV infection of well-differentiated, hNTCP-expressing human hepatoma-derived (Huh7) cells. Virol Sin. 2017 Dec;32(6):465-475. doi: 10.1007/s12250-017-3983-x. Epub 2017 Sep 29.PMID: 28971350 Free PMC article.（建系文章）
2、Zhao K, Guo F, Wang J, Zhong Y, Yi J, Teng Y, Xu Z, Zhao L, Li A, Wang Z, Chen X, Cheng X, Xia Y. Limited disassembly of cytoplasmic hepatitis B virus nucleocapsids restricts viral infection in murine hepatic cells. Hepatology. 2023 Apr 1;77(4):1366-1381. doi: 10.1002/hep.32622. Epub 2022 Jul 5. PMID: 35718932.
3、Zhao K, Liu S, Chen Y, Yao Y, Zhou M, Yuan Y, Wang Y, Pei R, Chen J, Hu X, Zhou Y, Zhao H, Lu M, Wu C, Chen X. Upregulation of HBV transcription by sodium taurocholate cotransporting polypeptide at the postentry step is inhibited by the entry inhibitor Myrcludex B. Emerg Microbes Infect. 2018 Nov 21;7(1):186. doi: 10.1038/s41426-018-0189-8. PMID: 30459339; PMCID: PMC6246608.
4、Yifei Yuan , Kaitao Zhao, Yongxuan Yao, Canyu Liu, Yingshan Chen, Jing Li, Yun Wang, Rongjuan Pei, Jizheng Chen, Xue Hu, Yuan Zhou, Chunchen Wu, Xinwen Chen. HDAC11 restricts HBV replication through epigenetic repression of cccDNA transcription. Antiviral Res. 2019 Dec:172:104619. doi: 10.1016/j.antiviral.2019.104619. Epub 2019 Oct 7.
5、Zhou M, Qin B, Deng XS, Zeng XL, Lu Y, Huang ZG, Wu CC, Mou LS. hNTCP‑expressing primary pig hepatocytes are a valuable tool for investigating hepatitis B virus infection and antiviral drugs. Mol Med Rep. 2019 Oct;20(4):3820-3828. doi: 10.3892/mmr.2019.10628. Epub 2019 Aug 29.PMID: 31485670
II 试剂与材料
hNTCP稳转肝癌Huh7D细胞系
常规培养基（DMEM+10%FBS+1%PS）
筛选培养基（常规培养基+5ug/mL Puromycin）
维持培养基（DMEM+10%FBS+1%PS+2.5%DMSO）
PBS
0.5%胰酶
TC处理培养瓶
移液枪头与移液枪
恒温水浴锅（37℃预热）
生物安全柜
离心机
37℃/5%CO2培养箱
75%酒精
III 冻存细胞的复苏与铺板
1. 紫外消毒生物安全柜15分钟；常规培养基放入37℃恒温水浴锅中充分预热。
2. 将冻存的细胞从冷藏位置经液氮迅速转移至37℃恒温水浴锅中。将冻存管尽可能多的浸入37℃水中，作规律的水平摇动，但必须确保冻存管盖子保持在水面以上。
3. 解冻冻存管约90-120秒，直至冻存管中只有少量碎冰漂浮即可。
4. 利用75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。
5. 300g，4℃离心5分钟；去掉上清并用常规培养基重悬。
6. 根据经验，沉淀的细胞用常规培养基重悬并定容至4ml，用台盼蓝排除法测定细胞的存活率和细胞总量。
7. 将细胞以1.5×104cells/cm2的密度接种至TC处理培养瓶中。摇匀，在37℃/ 5% CO2培养箱中培养。24小时后换液，之后隔天换液。
IV 细胞培养、传代与筛选
1. 细胞融合度达到 80%时可进行传代。
2. 吸除旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，约 2~3min； 利用常规培养基终止消化。
3. 收集细胞悬液，于300g，常温离心5分钟；去掉上清并用常规培养基重悬。
4. 按1：3或者1：4传代，将细胞悬液接种到新的细胞瓶内，置 37℃/5% CO2培养箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
5. 为了达到更好的感染效率，需对细胞系进行筛选，利用筛选培养基筛选1周，可对筛选后的细胞进行保存，用于后续试验。
6. 乙肝病毒感染请参照文章
PMID: 28971350，DOI: 10.1007/s12250-017-3983-x
按照常规癌细胞系冻存即可。
VI 关于售后
如您发现产品有任何质量问题，请您收集原始数据，并第一时间联系公司销售或者技术支持，公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同，操作人员习惯不同，熟练程度不一样，实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限，公司不做售后，请老师理解与支持。
售后有效期与提供的原始数据：
复苏问题：立刻报告异常；提供台盼蓝染色或者AO/PI染色。
污染问题：复苏96小时以内；提供相差显微镜照片。
纯度问题：一个月内；提供免疫荧光或者流式结果。
VII 联系电话
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