小核酸药药效评价
一、小核酸药简介
小核酸药物是由十几至几十个核苷酸串联组成的短核酸链，通过调控基因表达来治疗或控制疾病的一类核酸聚合物。其通过碱基互补配对的方式与靶基因结合，特异性调控、沉默致病基因表达或纠正基因点突变，进而起到治疗疾病的目的。
小核酸药主要包括反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide， ASO）、小干扰 RNA（small interfer-ing RNA， siRNA）、微小 RNA（microRNA， miRNA）、 核酸适配体（aptamer）等。理论上，任何基因片段都可以在体外合成对应的小核酸分子，因此小核酸药可突破传统小分子、抗体药物发现的瓶颈，攻克尚无药物的疾病。小核酸药物具有候选靶点丰富、特异性强、药效持久、不易产生耐药性、药物毒性小、药物不良反应小、设计合成工艺相对简单、药物研发周期短、生产相对快速、临床开发成功率高、转化医学基础深厚、应用领域广等诸多优点。目前小核酸药物临床应用较为广泛，如罕见病、慢性病和肿瘤等。目前，基于ASGPR-GalNAc肝靶向递送系统的药物开发是肝脏药物研究的新的方向。英克司兰（Inclisiran），是首个用于控制LDL-C水平的小干扰核酸（siRNA）药物，于2020年12月在欧盟获批，用于治疗成人高胆固醇血症及混合性血脂异常，并于2021年12月获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准上市。
二、模型简介
1、2D原代肝细胞
原代肝细胞培养作为一种理想的体外肝脏模型，是体外药物毒物实验的“金标准”。通过将原代肝细胞接种在一层固相的细胞外基质上—胶原进行单层培养，可以保留大多数肝特异性的功能。优势：原代肝细胞直接从人或动物肝脏分离，细胞中的酶量和辅助因子的水平均为正常的生理浓度，可在接近生理状态的情况下研究药物代谢及毒性；原代肝细胞培养较好地维持了肝细胞完整的形态和肝细胞体外代谢活性，可真实反应小核酸药物的摄取、转运、代谢情况。目前立沃共有14种的2D原代肝细胞模型，涵盖了市场上大多数物种的原代肝细胞，包括：人、猴、犬、猪、兔、大鼠、小鼠、牛、羊、驴、鸡、鸭、鹅、鱼等物种。
2、2D肝非实质细胞
肝非实质细胞是指不具有肝脏特有功能的细胞，这些细胞的功能主要是具有连接和支撑肝实质细胞的作用。LSEC（肝窦内皮细胞） 具有独特的表型，可促进肝实质细胞对血液中营养物质的接触与吸收。KCs （Kupffer细胞） 是流动性极高的肝巨噬细胞，是先天性免疫反应的一个重要组成部分，它在血红蛋白的降解、宿主防御、免疫耐受和肝脏在受到毒性损伤后的再生都起到了很重要的作用。此外，KCs 也参与到了一些比较常见的肝脏疾病的发病机制中，如酒精性和非酒精性肝损伤、肝脏纤维化等。在进行化合物肝毒性评价时，KCs 产生的促炎细胞因子如 TNF-α 和 IL-6 是保护肝毒性损伤的重要因素。HSC （肝星形细胞）胞质内富含脂滴，是维生素 A 的主要储存场所。当肝损伤发生后，HSC 被激活，细胞外基质 ECM 合成提高，并伴随增殖 增加，细胞迁移和黏附增强，收缩性、炎症和趋化性等特征的改变，是形成肝脏纤维化的主要细胞类型。
3、3D圆球体（mini-liver）
3D圆球体（Mini-liver）：通过将原代肝细胞与肝非实质细胞按一定比例混合，接种于超低吸附培养板，通过自组装的方式在24h内形成圆球体，实现圆球体的超长时间培养。
优势：Mini-liver是具有更好地模拟与细胞生长和细胞信号转导高度相关的细胞外微环境的能力，更接近人或动物的机体条件; 培养方式简单并可实现多种细胞共培养;形成的球体稳定，重复性好; 可以长期培养，且能够保持较高的白蛋白分泌水平和肝药酶活性；可以实现高通量和高含量的药物筛查以及药物肝毒性的筛选，对于小核酸药物的自由摄取、转运、代谢更为敏感。
二、服务资质、条件与团队
本公司按照GMP标准建设生物安全二级实验室，并完成卫健委备案，病原体范围：乙肝病毒、慢病毒等工具病毒、人体或动物样本。生物安全二级实验室配套检测设备、设施价值2000余万元，包括激光共聚焦、分选流式细胞仪、超高速离心机、实时荧光定量PCR仪等。技术团队包括美国医学与生物工程院院士、青年千人计划、深圳市高层次人才等；其中，周明博士，博士毕业于中科院武汉病毒研究所，从事肝脏研究14年，获得国家自然科学基金、博士后基金、广东省科技厅、深圳市科创委等项目资助7项。
三、服务流程
四、服务案例
案例1、Inclisiran对PSCK9表达影响
案例2、检测某阳性药物对某基因的敲低效果
案例3、检测某阳性药物对某基因的敲低效果
