运输方式
液氮运输
1、吸附式液氮运输，无游离液氮，冒白烟即说明正常。
2、温度监测设备严密监控运输过程中的罐内温度，如发现异常可拷贝温度记录仪上的PDF和excel数据（温度监测设备一头可拔掉，显示USB接头，插入电脑即可拷贝数据，如遇到困难，可联系销售人员和技术支持解决）。
3、合金密码锁，保证从发出到收货，没有第三方可以打开液氮罐接触细胞，保护细胞安全。
4、GPS定位器，细胞运输轨迹全程掌握，防止丢件。
5、液氮罐、温度监测设备、合金密码锁、GPS定位器为回收部件，请妥善保管，禁止破坏，否则会被拉入黑名单。
文章引用
略
适用范围
人肝窦内皮细胞（LSECs）作为肝脏中重要的非实质细胞，其独特的结构和功能使其成为多个科研领域的关键研究对象。以下是其主要的科研用途总结：
1. 肝脏疾病机制研究
LSECs在多种肝脏病理过程中发挥核心作用，是研究肝纤维化、脂肪肝、肝癌及肝再生的重要模型：
肝纤维化与肝硬化：LSECs失窗孔（毛细血管化）是肝纤维化的早期事件，通过激活肝星形细胞（HSCs）分泌胶原蛋白，驱动纤维化进程。
脂肪肝疾病：LSECs通过脂质代谢调控（如STAT3通路）和抗炎作用，影响非酒精性脂肪肝（NAFLD）和酒精性脂肪肝（AFL）的发展。
肝细胞癌（HCC）：LSECs分泌促血管生成因子（如VEGF），参与肿瘤微环境重塑及转移调控，其标志蛋白（如PLVAP）的异常表达与HCC预后相关。
肝再生：LSECs与肝细胞协同分泌生长因子（如HGF），促进损伤后的组织修复和功能恢复。
2. 免疫调控与耐受机制研究
LSECs在肝脏免疫微环境中具有双重角色，是研究免疫耐受与炎症平衡的关键靶点：
免疫耐受诱导：通过表达清道夫受体（如SR-H）和模式识别受体，LSECs清除病原体并抑制T细胞活化，维持肝脏的免疫耐受状态，但也可能导致病毒持续感染或肿瘤免疫逃逸。
炎症调控：LSECs分泌抗炎因子（如前列腺素、一氧化氮），抑制过度炎症反应，同时通过内吞功能清除血液中的内毒素和炎性介质。
肠-肝免疫轴协调：LSECs通过调控免疫细胞迁移（如巨噬细胞、T细胞），在肠道来源的抗原处理中起桥梁作用，影响炎性肝病的进展。
3. 药物代谢与纳米医学研究
LSECs的高效清道夫功能使其在药物递送与毒性评估中具有重要价值：
药物清除机制：LSECs通过清道夫受体（如Stabilin-1/2）快速清除血液中的大分子（如脂蛋白）和纳米颗粒，影响药物半衰期及疗效，是优化纳米药物设计的重要考量。
靶向治疗开发：研究LSECs的清除机制可为减少药物非特异性摄取提供策略，例如通过修饰纳米颗粒表面以避开LSECs的识别。
毒性评估模型：LSECs对药物或环境毒素的敏感性（如肝窦毛细血管化）常用于评估肝损伤机制及保护性药物的筛选。
4. 血管生物学与微循环研究
LSECs的独特血管特性为血管生成与微循环调控提供了研究平台：
血管通透性调控：LSECs的窗孔结构和动态变化（受Rho-ROCK通路调控）影响肝窦内外物质交换，是研究血管通透性机制的理想模型。
凝血与抗凝平衡：LSECs分泌肝素、PGI2等抗凝因子，维持肝窦内血流畅通，其功能异常与肝病中的血栓形成相关。
血管再生研究：LSECs分泌促血管生成因子（如VEGF、Angiopoietin-2），在肝再生或肿瘤血管生成中起关键作用。
5. 生物材料与组织工程应用
LSECs的生物学特性在人工肝支持系统和抗凝血材料开发中具有潜力：
人工肝装置：LSECs的内皮化表面可模拟天然肝窦的代谢和免疫屏障功能，用于构建生物反应器或器官芯片。
抗凝血材料：LSECs的天然抗凝特性（如分泌PGI2）被用于设计抗血栓涂层，改善医疗器械的生物相容性。
总结
人肝窦内皮细胞的科研用途涵盖肝脏疾病机制、免疫调控、药物开发、血管生物学及生物材料等多个领域，其多功能特性使其成为连接基础研究与临床转化的重要桥梁。未来研究可进一步探索LSECs在代谢调控（如维生素A储存）和跨器官互作（如肠-肝轴）中的新机制。
由于我司产品说明书半年更新一次，以下步骤仅作参考，以公司随货说明书为准
II 试剂与材料
Ø 肝窦内皮细胞（Cat# LV- LESC001/2/3/4）
Ø 肝窦内皮细胞培养基（Cat# LV- LSEM001）
Ø 胶原包被培养板/皿/瓶（LV-Coated）
Ø 无菌15ml离心管
Ø 一次性移液管
Ø 37℃/5%CO2培养箱
Ø 移液枪
Ø 恒温水浴锅（37℃预热）
Ø 冷冻水平离心机（带水平转子，可离心15ml离心管）
Ø 生物安全柜
Ø 宽口移液枪头（普通移液枪头剪去尖头，再灭菌使用）
Ø 75%酒精
重要提示：解冻时，冻存细胞转移必须使用液氮转移；在整个复苏实验过程中必须全程使用宽口枪头。
III 细胞的复苏与铺板
1. 肝窦内皮细胞培养基放入37℃恒温水浴锅中充分预热。
2.将冻存的肝窦内皮细胞从冷藏位置经液氮迅速转移至37℃恒温水浴锅中，将冻存管尽可能多的浸入
1. 37℃水中，顺时针水平摇动，但必须确保冻存管管盖保持在水面以上。
2. 解冻冻存管约90~120s，至冻存管中只有少量碎冰漂浮即可。
3. 用75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。
4. 用宽口枪头将细胞重悬（轻轻吹打2次），并转移至含10ml预热培养基的15ml离心管中（注意：冻存管与枪头上残留细胞，可用1ml复苏培养基润洗冻存管与枪头）。
5. 将细胞逐滴加入预热培养基中，最后轻微上下颠倒3次混匀。
6. 600g，4℃离心5min，去上清并用培养基重悬。
7. 沉淀的细胞用肝窦内皮细胞培养基重悬并定容至4ml，用台盼蓝排除法测定细胞的活力和细胞总量。
8. 将细胞按3×104cells/cm2接种至胶原包被培养板中。摇匀，在37℃/5%CO2培养箱中培养，24h后换液。
IV 细胞培养与传代
1. 细胞融合度达到80%时可进行传代。
2. 提前将培养基、PBS、胰酶放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
3. 吸除旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使加入的胰酶能盖住细胞，37℃孵育，约2~3min后显微镜下观察。
4. 待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞板，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液（控制吹打的力度，避免产生大量的气泡）。
5. 600g，室温离心5min，去上清并用肝窦内皮细胞培养基重悬。
6. 将细胞悬液按3×104cells/cm2接种到新的胶原包被培养瓶/板内，置37℃/5%CO2培养箱中培养，隔天观察贴壁生长情况。
细胞复苏后不可再冻存
V 关于售后
如您发现产品有任何质量问题，请您收集原始数据，并第一时间联系公司销售或者技术支持，公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同，操作人员习惯不同，熟练程度不一样，实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限，公司不做售后，请老师理解与支持。
售后有效期与提供的原始数据：
复苏问题：立刻报告异常；提供台盼蓝染色或者AO/PI染色。
污染问题：复苏96小时以内；提供相差显微镜照片。
纯度问题：一个月内；提供免疫荧光或者流式结果。
VI 联系电话
公司电话：0755-28284050
技术支持：19902901483（周博士）
