运输方式
液氮运输
1、吸附式液氮运输,无游离液氮,冒白烟即说明正常。
2、温度监测设备严密监控运输过程中的罐内温度,如发现异常可拷贝温度记录仪上的PDF和excel数据(温度监测设备一头可拔掉,显示USB接头,插入电脑即可拷贝数据,如遇到困难,可联系销售人员和技术支持解决)。
3、合金密码锁,保证从发出到收货,没有第三方可以打开液氮罐接触细胞,保护细胞安全。
4、GPS定位器,细胞运输轨迹全程掌握,防止丢件。
5、液氮罐、温度监测设备、合金密码锁、GPS定位器为回收部件,请妥善保管,禁止破坏,否则会被拉入黑名单。
文章引用
略
适用范围
人CD8+ T细胞的科研用途可高度概括为以下核心方向:
1. 肿瘤免疫治疗开发
CAR-T疗法:改造CD8+ T细胞靶向肿瘤抗原(如CD19、BCMA),用于血液瘤及实体瘤治疗。
免疫检查点研究:解析PD-1/CTLA-4抑制机制,优化抗PD-1单抗等药物的临床响应。
肿瘤微环境调控:研究CD8+ T细胞耗竭标志物(如TIM-3、LAG-3),探索联合治疗策略。
2. 抗感染免疫研究
病毒特异性应答:分析HIV、HCV感染中CD8+ T细胞逃逸机制,设计TCR-T细胞疗法或疫苗。
疫苗效力评估:通过IFN-γ ELISpot检测疫苗诱导的CD8+ T细胞应答强度。
3. 自身免疫病与免疫调控
调节性CD8+ T细胞:鉴定抑制自身反应性T细胞的亚群(如CD8+ Treg),用于多发性硬化症、1型糖尿病治疗探索。
炎症平衡机制:研究CD8+ T细胞在慢性炎症(如类风湿关节炎)中的促炎/抗炎双重作用。
4. 免疫衰老与慢性疾病
衰老标记分析:端粒缩短、CD28表达缺失与年龄相关免疫功能下降的关联。
代谢疾病关联:肥胖或糖尿病中CD8+ T细胞浸润脂肪组织的致病机制。
5. 新技术与转化医学
单细胞组学:解析肿瘤/感染中CD8+ T细胞克隆扩增及异质性(如组织驻留TRM细胞)。
TCR测序:筛选高亲和力TCR用于个体化免疫治疗。
总结
人CD8+ T细胞的研究聚焦肿瘤治疗、抗感染、自身免疫调控及衰老机制,结合基因编辑与组学技术,推动精准免疫疗法的临床转化。
由于我司产品说明书半年更新一次,以下步骤仅作参考,以公司随货说明书为准
I 试剂与材料
Ø 冻存CD4阳性T细胞(Cat# LV-CD4+T001/2)
Ø 培养基(完全RPMI1640培养基,见下表)
Ø 37℃恒温水浴锅
Ø 生物安全柜
Ø 15ml离心管
Ø 37℃/5% CO2培养箱
Ø 宽口滴管和宽口移液枪头
Ø 移液枪
Ø 75%酒精
II 完全RPMI1640培养基
成分 | 用量 |
不完全RPMI1640溶液 | 500ml |
左旋谷氨酰胺(L-Glu) | 2mM |
2-巯基乙醇(2-ME) | 50μM |
青霉素(Penicillin) | 100U/ml |
链霉素(Streptomycin) | 100μg/ml |
FCS(56℃灭活30min) | 50ml |
特别提醒:复苏培养基中补加300mM葡萄糖,可提升细胞活力及活细胞数。
III 细胞的复苏与铺板
重要提示:解冻时,冻存细胞转移必须使用液氮转移;在整个复苏实验过程中必须全程使用宽口枪头。
1. 完全RPMI1640培养基放入37℃恒温水浴锅中让其充分预热。
2. 将冻存的细胞从冷藏位置迅速转移至37℃恒温水浴锅中。将冻存管尽可能多的浸入37℃水中,作规律的水平摇动,但必须确保冻存管盖子保持在水面以上。
3. 解冻冻存管至刚好完全溶解成液体,约90-120秒。
4. 用75%酒精对冻存管消毒,并将其转移到生物安全
柜中。
5. 小心地将解冻后的细胞吸出,移至15ml离心管,并
用培养基润洗一遍冻存管及吸取细胞的枪头。
6. 一边摇晃离心管,一边加入完全RPMI1640培养基至12ml(注意:前3ml要缓慢逐滴加入并摇晃,后面9ml可加快速度),最后上下颠倒混匀。
7. 20℃,500g,升速7,降速4,离心8min。
8. 弃上清,加入3ml完全RPMI1640培养基重悬细胞,并用台盼蓝染色计数(V细胞悬液:V0.4%台盼蓝=9:1,细胞活率使用血球计数板手工计数,勿用细胞计数仪;细胞总数使用细胞计数仪计数)测定细胞的活力、细胞总数,建议细胞总数检测3次,求取平均值;为节约时间,细胞活率检测1次。
9. 按实验要求的密度进行铺板。
10. 在37℃/ 5% CO2培养箱中培养。
细胞复苏后不可再冻存
IV 关于售后
如您发现产品有任何质量问题,请您收集原始数据,并第一时间联系公司销售或者技术支持,公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同,操作人员习惯不同,熟练程度不一样,实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限,公司不做售后,请老师理解与支持。
售后有效期与提供的原始数据:
复苏问题:立刻报告异常;提供台盼蓝染色或者AO/PI染色。
污染问题:复苏96小时以内;提供相差显微镜照片。
纯度问题:一个月内;提供免疫荧光或者流式结果。
V 联系电话
公司电话:0755-28284050
技术支持:19902901483(周博士)