运输方式
液氮运输
1、吸附式液氮运输，无游离液氮，冒白烟即说明正常。
2、温度监测设备严密监控运输过程中的罐内温度，如发现异常可拷贝温度记录仪上的PDF和excel数据（温度监测设备一头可拔掉，显示USB接头，插入电脑即可拷贝数据，如遇到困难，可联系销售人员和技术支持解决）。
3、合金密码锁，保证从发出到收货，没有第三方可以打开液氮罐接触细胞，保护细胞安全。
4、GPS定位器，细胞运输轨迹全程掌握，防止丢件。
5、液氮罐、温度监测设备、合金密码锁、GPS定位器为回收部件，请妥善保管，禁止破坏，否则会被拉入黑名单。
文章引用
略
适用范围
1、药物开发：药物代谢。
由于我司产品说明书半年更新一次，以下步骤仅作参考，以公司随货说明书为准
II 试剂与材料
Ø 猴原代肝细胞（Cat# LV-PMonH001/2）
Ø 复苏培养基（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-Rec001）
Ø 纯化培养基（如需要，随细胞赠送）
Ø 铺板培养基（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-WEP007）
Ø 维持培养基（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-WEM007）
Ø 胶原包被板（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-Coated）
Ø William's Medium E（WE）培养基（悬浮肝细胞需要，客户自备）
Ø 非TC处理板（悬浮肝细胞需要，客户自备）
Ø 无菌15mL离心管
Ø 一次性移液管
Ø 宽口移液枪头（普通移液枪头剪去尖头，再灭菌使用）
Ø 移液枪
Ø 恒温水浴锅（37℃预热，请用温度计校准温度）
Ø 冷冻水平离心机（带水平转子，可离15mL离心管）
Ø 生物安全柜
Ø 37℃/5%CO2培养箱
Ø 75%酒精
重要提示：解冻时，冻存细胞转移必须使用液氮转移；在整个复苏实验过程中必须全程使用宽口枪头。
III 悬浮细胞的复苏
1. 生物安全柜中，将10mLWE培养基加入到15mL离心管中，37℃恒温水浴锅预热20分钟，然后转移到生物安全柜中待用；纯化培养基冰浴或4℃放置待用（如需要）；WE培养基37℃预热。
2. 将冻存的肝细胞从液氮中迅速转移至37℃恒温水浴锅中。将冻存管尽可能多的浸入水中（冻存管管 盖保持在液面以上），于水中顺时针大范围划圈。
3. 解冻冻存管约90 ~120ss，至冻存管中只有小块碎冰漂浮即可。
4. 用75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。
5. 用宽口枪头将细胞吸出，并以滴加方式转移至10mLWE培养基（注意：冻存管与枪头上残留细胞，可吸取1mLWE培养基润洗冻存管与枪头并将其混入离心管的培养基中），轻微上下颠倒离心管2-3次混匀。
6. 50g，常温离心5分钟。去上清，用WE培养基重悬，用台盼蓝排除法（V细胞悬液：V0.4%台盼蓝=9：1，细胞活率使用血球计数板手工计数，勿用细胞计数仪；细胞总数使用细胞计数仪计数）测定肝细胞的活力、细胞总数，建议细胞总数检测 3 次，求取平均值；为节约时间，细胞活率检测1次。根据客户实验要求确定铺板密度和药物浓度，如做悬浮细胞代谢功能测试，推荐铺12孔板或24孔板，铺板密度为1×106cells/ml，1ml/孔（参考团体标准T/CSCB0008-2021）。
7. 如果细胞活力低于70%，可利用纯化培养基去除死细胞：将细胞悬液离心，100g常温离心5分钟，去上清，用2mL纯化培养基（免费提供）重悬细胞，然后沿管壁向离心管小心加入1mLWE培养基（切勿扰动下层，加入后可见明显分层）；800g，4℃离心10分钟（升速为9，降速为1），离心后，吸取纯化培养基和WE培养基之间的浑浊带（活细胞层），转移到新的15mL离心管中，加入2倍体积的WE培养基；混匀后，50g，常温离心5分钟；去上清，用2mLWE培养基重悬细胞，后续计数及铺板同第6步骤。
细胞复苏后不可再冻存
VI 关于售后
如您发现产品有任何质量问题，请您收集原始数据，并第一时间联系公司销售或者技术支持，公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同，操作人员习惯不同，熟练程度不一样，实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限，公司不做售后，请老师理解与支持。
售后有效期与提供的原始数据：
复苏问题：立刻报告异常；提供台盼蓝染色或者AO/PI染色。
污染问题：复苏96小时以内；提供相差显微镜照片。
纯度问题：一个月内；提供免疫荧光或者流式结果。
VII 联系电话
公司电话：0755-28284050
技术支持：19902901483（周博士）
