产品介绍
hNTCP稳转细胞系,基于肝癌细胞系可个性化定制细胞系。
规格:T25瓶或冻存管
hNTCP稳转肝癌Huh7D细胞系
hNTCP-expressing Huh7D(Huh7D-hNTCP)
(可贴壁,Cat# LV-NTCP001)
(仅用于科学研究)
I 简介
hNTCP稳转肝癌Huh7D细胞系为中科院某实验室开发的,授权我司进行细胞共享。Huh7D是从若干株Huh7细胞中经过2.5%DMSO、4%PEG8000耐受实验筛选得到的一株优异的细胞系,主要优点是在2.5%DMSO诱导下,细胞呈致密单层、细胞发生明显极化和细胞分化、可长期维持、耐受4%PEG8000毒性等。通过慢病毒介导的乙肝病毒受体hNTCP过表达,细胞保存良好的细胞性状,高表达hNTCP,具有优异的乙肝病毒易感性。本细胞仅用于科学研究,除被授权外,不得转移给第三方使用,后果自负。
II 试剂与材料
-hNTCP稳转肝癌Huh7D细胞系
-常规培养基(DMEM+10%FBS+1%PS)
-筛选培养基(常规培养基+5ug/mL Puromycin)
-维持培养基(DMEM+10%FBS+1%PS+2.5%DMSO)
-PBS
-0.5%胰酶
-培养瓶
-移液枪头与移液枪
-恒温水浴锅(38℃预热)
-生物安全柜
-离心机
-37℃/5%二氧化碳培养箱
-75%酒精
III 细胞的复苏与铺板
1. 紫外消毒生物安全柜15分钟;常规培养基放入38℃恒温水浴锅中充分预热。
2. 将冻存的细胞从冷藏位置迅速转移至38℃恒温水浴锅中。尽可能多的浸入38℃水中,作规律的水平摇动,但必须确保冻存管盖子保持在水面以上。
3. 解冻冻存管约90-120秒,直至冻存管中只有少量碎冰漂浮即可。
4. 利用75%酒精消毒冻存管,并将其转移到生物安全柜。
5. 300×g,4℃离心5分钟;去掉上清并用常规培养基重悬。
6. 根据经验,沉淀的细胞用用常规培养基重悬并定容至4ml,用台盼蓝排除法测定细胞的存活率和细胞总量。
7. 将细胞以2×104个细胞/cm2的密度接种至培养瓶中。摇匀,在37℃/ 5% 二氧化碳培养箱中培养。24小时后换液,之后隔天换液。
IV 细胞培养、传代与筛选
1. 细胞融合度达到80%时可进行传代。
2. 吸除旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,约2~3min;利用常规培养基终止消化。
3. 收集细胞悬液,于300×g,4℃离心5分钟;去掉上清并用常规培养基重悬。
4. 按1:3或者1:4传代,将细胞悬液接种到新的细胞瓶内, 置37℃/5%二氧化碳培养箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
5. 为了达到更好的感染效率,需对细胞系进行筛选,利用筛选培养基筛选1周,可对筛选后的细胞进行保存,用于后续试验。
6. 乙肝病毒感染请参照文章
PMID: 28971350,DOI: 10.1007/s12250-017-3983-x
V 关于售后
如您发现有产品任何质量问题,请您收集原始数据,请第一时间联系公司销售或者技术支持,公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同,操作人员习惯不同,熟练程度不一样,实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限,公司不做售后,请老师理解与支持。
售后有效期与提供的原始数据:
复苏问题:复苏24小时以内;提供台盼蓝染色或者PI染色。
污染问题:复苏96小时以内;提供相差显微镜照片。
纯度问题:一个月内;提供免疫荧光或者流式结果。
参考文献: